Técnica de edición genómica en ECVI

La terapia génica para enfermedades cerebrovasculares se basa en la reducción de la expresión de un un gen en específico, esto se ha logrado con la el uso RNA de interferencia (shRNA) que induce al silenciamiento de mRNA, el shRNA es reconocido por RISC, esta es una nucleasa multipotente que tiene actividad helicasa con la capacidad de deshebrar al shRNA dúplex a través de una proteína catalítica (Argonauta), para que ayude al tratamiento se ha utilizado órganos diana.

• shRNA para ASK1 disminuyo el volumen del infarto y la muerte celular.
• shRNA en PAR1 disminución del volumen de infarto y déficit neurológico.
• GPR17 disminución en la pérdida neuronal, disfunción neurológica.

Link bibliográfico:

http://www.scielo.org.co/pdf/racefn/v41n158/0370-3908-racefn-41-158-00006.pdf

Terapia celular en ECVI

La terapia celular ha sido considerada un tratamiento favorable como medio para promover la reparación del sistema nervioso central después de un accidente cerebrovascular, esto se lo efectúa mediante la interacción con los sitios de lesión, así promoviendo la regeneración a la vez inhibiendo los efectos del proceso inflamatorio, esto se realizó con la ayuda de células mesenquimales aisladas de la médula ósea, aquí se establece factores de crecimiento, capacidad que tienen las células para diferenciarse en un linaje funcional que ayudarán a la regeneración de los tejidos lesionados. Estos parámetros fueron basados en la neurorehabilitación según la escala de Brunnstrom de discapacidad.

Link bibliográfico:

http://www.medigraphic.com/pdfs/celulas/cmb-2014/cmb141c.pdf

Transgénico en ECVI

Los prostanoides vasculares isomerizados a partir de la prostaglandina intermedia (PG), H2, producido por la ciclooxigensa (COX) ejercen efectos de protección y destructivos. Se crearon ratones transgénicos (CP-Tg) utilizando un método de microinyección pronuclear para revertir el la acción de PGI2 inflamatoria, el cual aumenta el efecto destructivo, para esto se generoun in-vivoModelo a través de ingeniería enzimática de COX-1 y prostaciclina sintasa (SIGP), estos se unieron y crearon un complejo de cadena única (SCHEC) COX-1-10aa-PGIS. Los ratones presentaron una marcada resistencia o Protección al ataque vascular, ictus, causado por trombosis o vasoconstricción.

Resistencia del ratón CP-Tg al ataque trombótico inducido por AA, paro cardiáco y muerte. (a) Diagrama del modelo de accidente cerebrovascular.

Ventajas:

• Producción de biofármacos.
• Producción de factores anti hemolíticos.
• Se puede incorporar características no naturales como nutrientes o características morfológicas (forma, color, sabor, color).
• Producción de vacunas obtenidas a partir de plantas transgénicas de bajo costo debido al material utilizado.
• Los productos obtenidos son genéticamente más resistentes a plagas, enfermedades, son más fáciles de cultivar, recolectar.

Desventajas:

• Resistencia a los antibióticos.
• El producto final puede generar agentes nuevos que inicien procesos de intolerancia o alergias alimentarias.
• Los genes pueden no desarrollar el carácter de la forma esperada y puede aumentar el rechazo frente al gen extraño y pueden generar enfermedades.
• Las bacterias y virus pueden incorporar un gen transgénico y tener resistencias al mismo.
• Invasión  de ecosistemas debido a la reproducción sin control de los alimentos transgénicos.

Links bibliográficos:

https://www.nature.com/articles/s41598-018-19661-y
http://www.agrobio.org/beneficios-cultivos-geneticamente-modifcados-colombia/

ADN recombinante en la naturaleza y en ECVI

En la naturaleza:
El ADN recombinante es una molécula ADN artificial formada in vitro por la unión de secuencias de ADN  de organismos diferentes.  Ha sido de mucha ayuda como en el caso de la creación de vacunas recombinantes para la avicultura y así controlar enfermedades infecciosas como Gunboro, Newcastle, laringotraquéitis infecciosa aviar y  además ayudó al control de la inocuidad de productos avícolas, las vacunas están compuestas de organismo vivos modificados, es decir que los genes virulentos han sido eliminados y reemplazados por genes de otros patógenos que se desea inmunizar, esto ayudo a disminución en las presentación de reacciones posvacunales, no causó lesiones en la bursa de Fabricio.

En ECVI:

La tecnología del ADN recombinante ha sido muy útil para el tratamiento de ECV, debido a que se ha podido crear el activador plasminógeno de tejido recombinante (rt- PA) es una forma génetica creada de t-PA, sustancia trombolítica creada naturalmente por el cuerpo. Este consiste en la recanalización del vaso ocluido por la administración intravenosa de alteplasa (rt- PA),  esta es dependiente del tiempo debido a que debe ser administrada dentro de las 4,5 horas después del comienzo del ictus, sirve como agente neuroprotector para limitar el daño isquémico al prevenir la muerte de neuronas que rodean el núcleo del infarto.

Links bibliográficos:
http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1900-96072014000200011&lang=pt
http://eprints.sim.ucm.es/33061/1/T36366.pdf

Prueba molecular de Hibridación in situ en ECVI

La hibridación se trata de un proceso en el cual se unen dos cadenas complementarias para formar una molécula ácido nucleico de doble cadena. Para la ECVI se ha realizado una técnica de hibridación in situ y microdisección de captura por láser acompañada con RT-PCR en tiempo real y se evaluó los niveles de miRNA-21, este tenía una regulación positiva en las neuronas de la zona límite isquémica, se le considera una molécula terapéutica debido a que durante los estudios suprimió la muerte apoptótica inducida por la disminución de oxígeno y glucosa.

Link bibliográfico:

https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC2957309/

Prueba de PCR en ECVI

En la enfermedad cerebrovascular isquémica puede haber una causa infecciosa entre 1% a 10% como el Trypanosoma Cruzi.

Tema: Comparación de siete pruebas para detectar la infección por Trypasoma Cruzi en pacientes.

Objetivo: Compara la capacidad diagnóstica de siete métodos para determinar la infección por Trypasoma Cruzi.

Tipo de muestra biológica: muestra de sangre - capa leucitaria

Ácido nucleico: ADN genómico

                      Extracción: ciclador térmico PTC-200 DNA Engine 

Gen a amplificar: minicircle Kinetoplast 330pb

                             ADN nuclear 188 pb

PCR: convencional

          Desnaturalización: 94° - 1min

          Hibridación: 63.5° - 1min                       35 ciclos

          Extensión: 72° - 1min

Visualización: EFO con gel de agarosa al 2% teñido con bromuro de etidio.

Link bibligráfico: 

http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1657-95342014000200003&lang=pt

Pruebas de Tamizaje y confirmatorias de ECVI

Las pruebas de tamizaje nos ayudan a detectar trastornos metabólicos, genéticos en personas sanas para así poder tratar al paciente antes de que presente síntomas. En el caso del ACVI existen dos tipos de pruebas que son: Cincinnati o la LAPPS (Los Angeles Prehospital Stroke Screen).

Las  pruebas confirmatorias también son utilizadas:

• Tomografía computarizada (TC): utiliza rayos X para tomar fotos del cerebro.
• Imagen de resonancia magnética (IRM): puede mostrar los cambios en el cerebro producidos por ACV, también muestra hemorragias o problemas de circulación sanguínea.
• Angiografía por TC o RM: es una película rediográfica de los vasos sanguíneos y del flujo de la sangre a través de ellos.
• Ultrasonido de carótida: utiliza ondas sonoras para crear una imagen de las arterias carótidas que suministran sangre al cerebro.
• Ultrasonido Doppel transcraneal (DTC): utiliza ondas sonoras para medir flujo sanguíneo.

Links bibliográficos:
http://www.scielo.org.bo/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1817-74332017000200005
https://www.minsal.cl/portal/url/item/7222754637e58646e04001011f014e64.pdf
https://www.sac.org.ar/wp-content/uploads/2014/04/2894.pdf